空氣消毒機病(bìng)毒滅活試(shì)驗是一種個體微(wēi)小(xiǎo)，結(jié)構(gòu)簡單，隻(zhī)含一種(zhǒng)核酸(suān)（DNA或(huò)RNA），必須在活(huó)細胞(bāo)內寄生並以復製方(fāng)式增殖的非細胞型生物(wù)。

       病毒是一種(zhǒng)非(fēi)細(xì)胞生命形(xíng)態，它由一個(gè)核(hé)酸長(cháng)鏈和(hé)蛋白質外殼構(gòu)成(chéng)，病毒(dú)沒(méi)有自己(jǐ)的代(dài)謝機(jī)構，沒有(yǒu)酶(méi)係(xì)統(tǒng)。因此病(bìng)毒(dú)離開(kāi)了宿主細(xì)胞(bāo)，就成了沒有(yǒu)任(rèn)何(hé)生命活(huó)動
，也(yě)不能獨立自(zì)我繁殖的(dí)化學物(wù)質(zhì)。它(tā)的(dí)復(fù)製(zhì)
，轉錄(lù)
，和(hé)轉(zhuǎn)譯(yì)的能力(lì)都是在宿主(zhǔ)細胞中進行(háng)，當(dāng)它(tā)進入(rù)宿主(zhǔ)細胞後(hòu)，它(tā)就可(kě)以利(lì)用(yòng)細胞(bāo)中(zhōng)的物質(zhì)和(hé)能(néng)量完成生(shēng)命活(huó)動，按(àn)照(zhào)它自己的核(hé)酸所(suǒ)包(bāo)含的遺傳信(xìn)息(xī)產(chǎn)生和它一樣的新一(yī)代病(bìng)毒(dú)。
 

       空氣消毒機(jī)病毒(dú)滅(miè)活試驗是(shì)一種可(kě)以在(zài)其(qí)它生物體間傳(chuán)播並(bìng)感(gǎn)染(rǎn)生(shēng)物(wù)體的微小生(shēng)物（其實因(yīn)為病毒本身(shēn)不(bù)能(néng)進(jìn)行(háng)新陳代謝(xiè)，所(suǒ)以(yǐ)某種程(chéng)度上還(huán)不能說病(bìng)毒是(shì)生物）。有時(shí)使用(yòng)“病毒(dú)”描述(shù)那(nà)些(xiē)在真(zhēn)核(hé)生物(wù)中傳播(bō)和(hé)感(gǎn)染(rǎn)的生物
；使(shǐ)用“噬菌(jūn)體”或“吞噬(shì)體(tǐ)”來描(miáo)述(shù)那些在(zài)原核(hé)生(shēng)物(wù)間(jiān)傳播的生(shēng)物(wù)。

       滅(miè)菌(jūn)：是指用物理或化(huà)學的方法殺滅全(quán)部(bù)微生物，包括致病和非致(zhì)病(bìng)微生(shēng)物以(yǐ)及芽孢，使之達到(dào)無(wú)菌保(bǎo)障水平(píng)。經過滅菌處(chǔ)理後(hòu)，未被汙染的物(wù)品(pǐn)，稱無菌物(wù)品(pǐn)。經過(guò)滅菌(jūn)處(chǔ)理(lǐ)後(hòu)，未被(bèi)汙染的(dí)區(qū)域，稱為無(wú)菌區(qū)域(yù)。

       消(xiāo)毒(dú)：消毒是(shì)指殺死病原微生物
，但(dàn)不(bù)一(yī)定(dìng)能殺死(sǐ)細菌芽(yá)孢(bāo)的方(fāng)法。通常用化學(xué)的(dí)方(fāng)法來(lái)達到(dào)消(xiāo)毒(dú)的(dí)作(zuò)用(yòng)。用於(yú)消毒的化學(xué)藥物(wù)叫做消毒(dú)劑(jì)。

       通過(guò)上麵的(dí)兩個(gè)概念(niàn)你可以(yǐ)知道(dào)無(wú)論是(shì)細(xì)菌(jūn)還是病(bìng)毒在滅菌(jūn)操作(zuò)下(xià)都(dū)會被殺死，滅菌操(cāo)作下除部分(fēn)細(xì)菌(jūn)的(dí)芽(yá)孢(bāo)基本微(wēi)生物(wù)都(dū)可以殺滅，不(bù)過(guò)也根據消毒液使(shǐ)用的(dí)不同或者微(wēi)生物(wù)的耐受(shòu)不同(tóng)而(ér)效果(guǒ)不(bù)同。

 　  空(kōng)氣消(xiāo)毒(dú)機病(bìng)毒(dú)滅活試(shì)驗是利(lì)用某(mǒu)種有(yǒu)代表(biǎo)性的活病毒(dú)及(jí)其(qí)細(xì)胞感(gǎn)染技術(shù)，評(píng)價各(gè)種(zhǒng)消(xiāo)毒因(yīn)子(zǐ)的病(bìng)毒殺(shā)滅效果(guǒ)，驗證消(xiāo)毒(dú)因子(zǐ)的病毒滅活(huó)能(néng)力。
 

　　病(bìng)毒滅(miè)活檢測，首先需要根(gēn)據具體(tǐ)的產(chǎn)品具(jù)體的病(bìng)毒滅活分析(xī)，病(bìng)毒(dú)滅活(huó)效果驗證，要找專業可(kě)靠(kào)具備CMA資質認(rèn)證(zhèng)的病(bìng)毒(dú)殺滅試(shì)驗(yàn)檢(jiǎn)測中心機(jī)構--廣(guǎng)州(zhōu)市微(wēi)生物(wù)研究所有(yǒu)限(xiàn)公(gōng)司(sī)。

       病毒殺滅效果(guǒ)試驗，主(zhǔ)要適用(yòng)於(yú)消毒(dú)產品鑒(jiàn)定(dìng)或日常監測。用具(jù)有一(yī)定代表(biǎo)性的(dí)
，活的(dí)病毒(dú)及(jí)其細胞感(gǎn)染(rǎn)技術，評價(jià)各(gè)種(zhǒng)用途(tú)的消毒因子對測(cè)試病毒的殺(shā)滅(miè)效(xiào)果。按此方法進行的試(shì)驗，隻是(shì)對消毒(dú)因子的(dí)滅活病(bìng)毒(dú)能力的重(zhòng)要(yào)方(fāng)麵進行驗證。

       具體的病(bìng)毒(dú)殺(shā)滅(miè)試驗(yàn)檢測(cè)，不同的檢測(cè)單位機構，收費標(biāo)準(zhǔn)不同(tóng)。不同(tóng)的病毒殺滅驗證，收費(fèi)要(yào)求也會不(bù)同(tóng)。本(běn)公司通過實(shí)驗室(shì)資質認(rèn)定(dìng)，具備CMA及CNAS資質認證(zhèng)，能(néng)夠嚴(yán)格按照病毒滅(miè)活驗(yàn)證(zhèng)標準(zhǔn)方(fāng)法，進(jìn)行試驗檢測，出(chū)具可(kě)靠的CMA報(bào)告。

    病(bìng)毒失(shī)去(qù)感(gǎn)染性(xìng)，稱(chēng)為滅活(huó)。了(liǎo)解滅(miè)活(huó)的條(tiáo)件(jiàn)不僅對(duì)從(cóng)患者分離病毒(dú)
，防(fáng)腐和消毒是(shì)必要的(dí)，而(ér)且和疫(yì)苗生(shēng)產(chǎn)也(yě)有關係。病毒滅(miè)活的(dí)機理有三。

        一
，破壞(huài)包(bāo)膜(mó)：包(bāo)膜(mó)含有脂類(lèi)物質(zhì)，因(yīn)之有包膜的(dí)病(bìng)毒可迅速被脂溶劑(jì)破壞，如(rú)去(qù)氧膽酸鈉(nà)可使病毒滅(miè)活(huó)。實際上可利(lì)用(yòng)病(bìng)毒對(duì)脂(zhī)溶(róng)劑(jì)的敏感(gǎn)性來(lái)檢(jiǎn)查病(bìng)毒是否有包膜(mó)。物理(lǐ)因(yīn)子(zǐ)，如(rú)滲透(tòu)壓改(gǎi)變(biàn)
，凍融
，熱和幹(gān)燥等都可(kě)引起(qǐ)包膜(mó)破壞(huài)。一般(bān)認為，呼(hū)吸道(dào)感染的病毒(dú)對於燥抵抗(kàng)力(lì)弱(ruò)，傳播(bō)主要(yào)是人間直接感染，這是因為有(yǒu)包(bāo)膜的原故。

       二
，病毒蛋白質變性：能使蛋(dàn)白(bái)質變性的化學(xué)製劑(jì)都能使(shǐ)病毒滅活，加(jiā)熱引起(qǐ)變(biàn)性也是有(yǒu)效(xiào)滅(miè)活的(dí)方(fāng)法(fǎ)。一(yī)般說病(bìng)毒對熱抵抗力(lì)弱，60℃幾(jī)分(fēn)鐘就使(shǐ)之感染性明顯降(jiàng)低，因此(cǐ)在分離病(bìng)毒時(shí)，從(cóng)患(huàn)者(zhě)取(qǔ)來(lái)的標本需(xū)低溫保存，迅(xùn)速送往實驗(yàn)室(shì)，長期保存要(yào)置於-80℃以(yǐ)下(xià)的低溫條件(jiàn)。

        三
，病毒(dú)核酸的損(sǔn)害(hài)：X綫
，γ綫等電離輻(fú)射(shè)可切斷(duàn)核(hé)酸，紫(zǐ)外(wài)綫(xiàn)可使(shǐ)核苷(gān)酸(suān)鏈上相鄰(lín)的嘧啶(dìng)鹼基(jī)形成二聚物(wù)，而(ér)破壞(huài)病(bìng)毒基因(yīn)的功(gōng)能(néng)。另(lìng)外吖啶(dìng)橙(chéng)或中(zhōng)性(xìng)紅等(děng)染料可(kě)與病毒核酸(suān)結合(hé)，暴(bào)露於(yú)光綫之下(xià)，可使核(hé)酸分解，而(ér)使(shǐ)病(bìng)毒(dú)滅活(huó)。

　　近年來(lái)，隨著單抗(kàng)市場(cháng)在國內的興(xīng)起，對(duì)病(bìng)毒(dú)清(qīng)除技(jì)術(shù)（滅(miè)活和去(qù)除(chú)）的驗證也提(tí)出了更(gēng)高(gāo)的要(yào)求，從最初(chū)的低(dī)pH孵育(yù)到最近幾(jī)年(nián)除病毒膜過濾技術在病毒清除(chú)方麵的成(chéng)熟(shú)的(dí)應(yīng)用，包(bāo)括層(céng)析(xī)技(jì)術(shù)也(yě)逐(zhú)漸被(bèi)大(dà)家(jiā)重(zhòng)視(shì)，從而進一步提(tí)高下(xià)遊(yóu)工藝對於(yú)病(bìng)毒的總(zǒng)的(dí)對數清除率(shuài)。

　　在驗證(zhèng)實驗中(zhōng)，不管(guǎn)是(shì)哪種(zhǒng)病毒清(qīng)除技術(shù)，都是通過(guò)人(rén)為(wéi)挑(tiāo)戰(zhàn)病毒，然(rán)後采用(yòng)感染力(lì)或者(zhě)其他(tā)適(shì)合的(dí)分析方(fāng)法來(lái)估測樣品(pǐn)中(zhōng)的(dí)病毒滴度(dù)，然後測量出(chū)該步驟的病毒對數清(qīng)除(chú)率，因(yīn)此(cǐ)選擇一種合(hé)適的(dí)病(bìng)毒(dú)滅活(huó)檢(jiǎn)測分析方法對(duì)於病毒(dú)對數(shù)清除率(shuài)的(dí)計算非常(cháng)重要。

　　在病毒清除驗證中(zhōng)，病毒(dú)的檢(jiǎn)測分(fēn)為(wéi)三種情況：

　　1
，根據(jù)病毒的感染(rǎn)性來(lái)定量(liáng)病(bìng)毒(dú)的(dí)滴(dī)度，有(yǒu)兩種方法(fǎ)，一稱(chēng)為病毒(dú)空(kōng)斑(bān)形成(chéng)實(shí)驗。二稱作(zuò)TCID50半數細(xì)胞(bāo)培養(yǎng)物感染(rǎn)量實驗(yàn)，這(zhè)種檢(jiǎn)測方(fāng)法(fǎ)是以細胞培(péi)養(yǎng)物中產生(shēng)細(xì)胞病(bìng)變(biàn)效應（Cyto-pathic Effect，CPE）為(wéi)基礎的檢測手段。

　　2
，定量PCR的(dí)方(fāng)法，盡(jìn)管(guǎn)空斑形成和TCID50這(zhè)兩(liǎng)種(zhǒng)以細(xì)胞為(wéi)基礎(chǔ)的感(gǎn)染(rǎn)性(xìng)分析(xī)被視(shì)為(wéi)病毒(dú)清(qīng)除研究中(zhōng)的(dí)估(gū)測(cè)病毒(dú)滴度的(dí)金(jīn)標(biāo)準，qPCR方法(fǎ)已經被迅(xùn)速(sù)接受(shòu)為(wéi)病毒清除研(yán)究(jiū)中估測(cè)病(bìng)毒粒子的(dí)替代(dài)和(hé)補(bǔ)充方法。

　　3
，直接用電子顯微鏡來計(jì)數病毒(dú)數(shù)目(mù)，但(dàn)是由(yóu)於該(gāi)方法不(bù)能區(qū)分感染性(xìng)病(bìng)毒顆粒與非(fēi)感(gǎn)染(rǎn)性(xìng)病毒(dú)顆粒(lì)，因此(cǐ)無(wú)法(fǎ)判斷病(bìng)毒的(dí)感染力，主(zhǔ)要用於細胞發酵液(yè)的(dí)病毒初(chū)始(shǐ)量(liáng)的(dí)計算(suàn)中(zhōng)，因(yīn)此著重(zhòng)介紹(shào)空斑形成實驗(yàn)，TCID50實驗和qPCR三種檢測(cè)方(fāng)法。

 　　一
，病毒培育與(yǔ)滅活實(shí)驗(yàn)

　　1. 實驗材料(liào)

　　實驗(yàn)用病毒(dú)株(zhū)，宿主(zhǔ)細(xì)胞(bāo)，細胞(bāo)培養瓶(píng)與 96 孔(kǒng)培養板，恒溫水 浴箱，二(èr)氧(yǎng)化(huà)碳(tàn)培(péi)養箱，層(céng)流(liú)超(chāo)淨工作台，-80℃低溫箱(xiāng)，二(èr)氧化碳(tàn)培養(yǎng)箱，液(yè)氮(dàn)，離心(xīn)設(shè)備，移液(yè)器，細胞維持培養基，細(xì)胞(bāo)*培養(yǎng)基，去離子水等。

　　2.實驗(yàn)過(guò)程(chéng)

　　病毒(dú)懸液(yè)製(zhì)備：實(shí)驗組，陽性對照(zhào)組，陰(yīn)性對照組。病毒培育需(xū)每(měi)日觀察(chá)細胞與(yǔ)宿主細胞生(shēng)長情況(kuàng)，接種細胞，病變收獲(huò)病(bìng)毒， 每(měi)組(zǔ)按(àn)照(zhào)特(tè)定(dìng)條(tiáo)件(jiàn)設(shè)置(zhì)病毒(dú)滅(miè)殺(shā)實驗驗證(zhèng)，並每組(zǔ)進行(háng)噬(shì)斑病(bìng)毒(dú)感(gǎn)染滴(dī)度測定(dìng)。平均滅活對數值計算(suàn)，評(píng)價。

       病(bìng)毒(dú)滅活檢(jiǎn)測的試驗(yàn)階段(duàn)：

       空氣消(xiāo)毒(dú)試(shì)驗(yàn)分為實驗室(shì)試(shì)驗(yàn)
，模(mó)擬(nǐ)現(xiàn)場試(shì)驗(yàn)與現場試驗，各(gè)自(zì)特點如下：

       (1)實(shí)驗(yàn)室(shì)試(shì)驗(yàn)：以測定低有(yǒu)效劑(jì)量(liáng)為目的，采(cǎi)用(yòng)≥1m試驗櫃
，液體撞擊式采樣器
，白色葡萄(táo)球菌，試(shì)驗(yàn)菌霧(wù)粒<10μm，試(shì)驗(yàn)溫度(dù)在20℃到(dào)25℃之間，相(xiāng)對濕(shī)度保持在50%~70%，中和劑加於采(cǎi)樣(yàng)液(yè)中(zhōng)，試驗(yàn)時需要(yào)自(zì)然消(xiāo)亡(wáng)對(duì)照(zhào)組(zǔ)，計算殺滅率結(jié)果。同一(yī)條件試驗(yàn)重(zhòng)復(fù)3次(cì)，每(měi)次均分別(bié)計算其殺滅(miè)率(shuài)。3次結果(guǒ)的(dí)殺滅(miè)率均≥99.90%時,可判為消毒合格。

       (2)模(mó)擬現場試(shì)驗(yàn)：以測定(dìng)低有(yǒu)效劑量為(wéi)目的(dí)，采用10m~20m實(shí)驗室
，六(liù)級篩孔(kǒng)空(kōng)氣(qì)撞擊式(shì)采(cǎi)樣器
，白色(sè)葡萄球菌，試驗(yàn)菌霧(wù)粒<10μm，試(shì)驗溫(wēn)度(dù)在(zài)20℃到25℃之間，相(xiāng)對濕度保持(chí)在50%~70%，中(zhōng)和劑(jì)加於采樣培(péi)養(yǎng)基(jī)中，試(shì)驗時需(xū)要自(zì)然消(xiāo)亡對照(zhào)組，計算殺滅(miè)率(shuài)結果。同一條(tiáo)件試驗(yàn)重復3次，每次(cì)均分別(bié)計(jì)算其殺滅率。3次結果(guǒ)的殺(shā)滅率(shuài)均≥99.90%時,可(kě)判為(wéi)消毒合格。

       (3)現場試(shì)驗：以驗證實(shí)用(yòng)消毒(dú)效果為(wéi)目的(dí)，采用≥20m實(shí)驗室
，六(liù)級(jí)篩(shāi)孔空氣撞(zhuàng)擊(jī)式采樣器
，空氣(qì)中(zhōng)自然菌(jūn)，試驗菌霧(wù)粒(lì)不定，試(shì)驗溫度和相對濕(shī)度均為(wéi)自(zì)然條件，中和(hé)劑加於(yú)采(cǎi)樣培養(yǎng)基(jī)中，試(shì)驗時不(bù)需(xū)要自(zì)然(rán)消(xiāo)亡對照組(zǔ)，計(jì)算(suàn)消(xiāo)亡率結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次或(huò)以上。計(jì)算出每(měi)次的消(xiāo)亡(wáng)率。除(chú)有特殊(shū)要(yào)求(qiú)者外(wài)，對無(wú)人(rén)室(shì)內(nèi)進(jìn)行的(dí)空氣(qì)消(xiāo)毒，每次(cì)的自然(rán)菌(jūn)消亡率均≥90%者(zhě)為合格。